Комплексное
оснащение лабораторий

  • +7(499)742-86-21
  • +7(499)742-87-21
  • +7(499)755-66-79

Многоканальный: +7(495)660-35-58

Оборудование для ПЦР

В настоящее время метод ПЦР широко распространен как в медицине, так и в научных кругах. Это, прежде всего, связано с существенным подешевевшем оборудования и реактивов, используемых, в этом методе.  В основе метода ПЦР лежит природный процесс репликации ДНК с помощью особых ферментов ДНК-полимераз. Так называемая репликация ДНК. С помощью  ферментов, который тщательно подбирается к поставленной задачи, достигается практическое увеличение (в геометрической прогрессии) заданного фрагмента ДНК (репликация) что позволяет сделать его видимым для физической детекции.

 

В настоящее время метод ПЦР широко распространен как в медицине, так и в научных кругах. Это, прежде всего, связано с существенным подешевевшем оборудования и реактивов, используемых, в этом методе.  В основе метода ПЦР лежит природный процесс репликации ДНК с помощью особых ферментов ДНК-полимераз. Так называемая репликация ДНК. С помощью  ферментов, который тщательно подбирается к поставленной задачи, достигается практическое увеличение (в геометрической прогрессии) заданного фрагмента ДНК (репликация) что позволяет сделать его видимым для физической детекции.

Самыми важным в методе ПЦР является правильный подбор  праймера (искусственно синтезированные олигонуклеотиды), имеющие, как правило, размер от 15 до 30 нуклеотидов, идентичные соответствующим участкам ДНК определяемого субстрата. Они играют ключевую роль в образовании продуктов реакции ПЦР. С помощью праймеров и Tag-полимеразы синтезируется цепочка ДНК.

Вся реакция ПЦР состоит из 3 основных этапов: 

  1. Денатурация - разложение ДНК в пробе;
  2. Отжиг - ограничение искомой ДНК;
  3. Синтез.

    Для правильного построения процесса репликации очень важно правильно подготовить исследуемый образец. Это значит, что надо максимально получить чистую исследуемую ДНК. Удалить из биопрепарата все посторонние примеси исключить дальнейшую денатурацию ДНК. Тем самым получить препарат, содержащий чистую ДНК пригодную для постановки реакции амплификации. 

    Есть два основных способа постановки реакции ПЦР:

    1. ПЦР с анализом результатов по конечной точки.  В этом случае всю реакцию ПЦР проводят в закрытой пробирки, а результат определяют флуоресцентным методом  после завершения амплификации.  Существенным недостатком этого метода является отсутствие возможности наблюдения за образованием продукта. 
    2. ПЦР в реальном времени – наиболее современный метод, который позволяет количественно определить ДНК в режиме реального времени а так же понять как происходит процесс накопления ДНК во времени.

    Метод ПЦР анализа по конечной точке дает возможность ответить на вопрос о присутствии или отсутствии искомого контрагента.   ПЦР в режиме «реального времени» (Real-Time PCR) позволяет оценить количество исследуемой молекулы ДНК.

    Детекция результатов ПЦР можно проводить различными методами, самый распространенный является метод электрофоретический (разделение молекул ДНК по размеру в агарозном геле). Может быть как горизонтальный так и вертикальный электрофорез.

    В настоящее время метод ПЦР получил широкое распространение не только в науки, но и в медицине. С помощью этого метода, возможно,  провести раннюю диагностику не только распространенных инфекций но и социально значимых инфекций, выявления которых очень важно для раннего постановке диагноза и предотвращения передачи заболевания другим людям.