Набор для выделения РНК на магнитных частицах 2000 выделений

Набор предназначен для выделения и очистки РНК из мазков или соскобов эпителиальных клеток, вирусов. Принцип действия набора основан на селективной сорбции нуклеиновых кислот из предварительно лизированного образца на магнитных частицах на основе оксида железа и оксида кремния, последующей промывке и элюции очищенного продукта. В процессе выделения целостность РНК сохраняется.

Выделение РНК возможно как ручным способом, с помощью магнитного штатива, так и автоматическим способом, с использованием автоматических станций Auto-Pure96 (Allsheng) и KingFisher Flex (ThermoScientific).

Важно! Выделенная РНК содержит примесь ДНК. При использовании РНК в приложениях, чувствительных к наличию ДНК, например, ПЦР обязательна обработка ДНКазой.

Важно! Отличие «Набор для выделения РНК на магнитных частицах» (Кат. № MRP100, MRP200, MRP2000) от «Набор для выделения РНК на магнитных частицах» (Кат. № NAmagp100, NAmagp200, NAmagp2000) заключается в том, что буферы для лизиса (LB) и промывки (WB) в позициях Кат. № MRP100, MRP200, MRP2000 содержат в составе изопропанол. Не требуется использование этанола и какихлибо других реагентов. Буферы готовы к работе.

Время выделения с использованием автоматических станций Auto-Pure96 (Allsheng) и KingFisher Flex (ThermoScientific) составляет 20 минут.

Состав набора

* MRP200 – поставляется 2 набора MRP100.

** MRP2000 – поставляется 20 наборов MRP100.

Меры предосторожности

Осторожно! Буфер для лизиса LB содержит раствор хаотропной соли, оказывающий раздражающее и токсичное действие. При работе необходимо соблюдать правила общей и личной техники безопасности. Токсичен при попадании на кожу и внутрь. Вызывает ожоги.

При попадании на кожу промойте немедленно большим количеством воды и моющего средства (детергента). При необходимости покажитесь врачу.

Материалы и оборудование необходимые для работы

Ручной способ

• Магнитный штатив для микроцентрифужных пробирок на 1.5-2 мл
• Нагревательный блок, поддерживающий температуру до 50°C
• Микроцентрифужные пробирки на 1.5-2 мл

Автоматический способ

• Глубоколуночный планшет с V-образными лунками на 2 мл, 3-4 шт.
• Наконечники для магнитных стержней или гребёнка, 1 шт.

Перед началом работы:

• Важно! Если в буфере LB образовался осадок, то инкубировать буфер при 30-50 °C с периодическим перемешиванием до полного растворения осадка.
• При выделении РНК с использованием автоматической станции или из большого количества проб подготовить смесь буфера для лизиса (LB) и магнитных частиц (M). Смешать буфер для лизиса (LB) и магнитные частицы (M). Подготовить необходимый объём данной смеси, исходя из количества проб.
  Примечание: рекомендуется увеличить полученный объём на 10%.
  1 проба. 700 мкл буфера для лизиса LB, 10 мкл магнитных частиц, суммарный объём 710 мкл.
  100 проб (+10%). 77 мл буфера для лизиса LB, 1.1 мл магнитных частиц, суммарный объём 78.1 мл.

Протокол выделения РНК. Ручной способ

Выделение РНК проводится при комнатной температуре (15-25 °C).

1) Лизис образца

1. Отобрать аликвоту объёмом 100 мкл физраствора или транспортной среды после инкубации ватной палочки с соскобом или мазком эпителиальных клеток. Добавить 700 мкл буфера для лизиса LB. Тщательно перемешать пипетированием, избегая пенообразования.
2. Инкубировать 10 минут при 50 °C.

2) Сорбция образца на магнитных частицах

1. Ресуспендировать магнитные частицы перемешиванием вручную или на вортексе до образования однородной суспензии.
2. К лизату добавить 10 мкл суспензии магнитных частиц, сразу же перемешать пипетированием или на вортексе до получения однородной суспензии.
3. Инкубировать 10 мин.
4. Поместить пробирку с образцом в магнитный штатив. Инкубировать 5 мин.
   Примечание: убедиться, что магнитные частицы собрались на стенке пробирки. Если значительная доля частиц осталась в растворе, то увеличить время инкубации.
5. Не убирая пробирку с магнитного штатива, аккуратно отобрать супернатант, не задевая магнитные частицы.

3) Промывка магнитных частиц.

1. Добавить в пробирку с магнитными частицами 500 мкл буфера для промывки WB. Тщательно перемешать пипетированием или на вортексе до получения однородной суспензии.
2. Поместить пробирку с образцом в магнитный штатив. Инкубировать 5 мин.
   Примечание: убедиться, что магнитные частицы собрались на стенке пробирки. Если значительная доля частиц осталась в растворе, то увеличить время инкубации.
3. Не убирая пробирку с магнитного штатива, аккуратно отобрать супернатант, не задевая магнитные частицы.
4. Повторить п. 1-3.
5. Сушить пробирку с магнитными частицами на воздухе при 15-25 °C 5-15 минут или до полного высыхания (устранения запаха спирта).

4) Элюция РНК.

1. Добавить в пробирку с магнитными частицами 50-100 мкл буфера для элюции EB. Тщательно перемешать пипетированием или на вортексе до получения однородной суспензии. Инкубировать 5 мин при 15-25 °C.
   Примечание: Буфер для элюции – вода, очищенная от РНКаз.
2. Поместить пробирку с образцом в магнитный штатив. Инкубировать 5 мин.
   Примечание: убедиться, что магнитные частицы собрались на стенке пробирки. Если значительная доля частиц осталась в растворе, то увеличить время инкубации.
3. Не убирая пробирку с магнитного штатива, аккуратно отобрать, не задевая магнитные частицы, и перенести супернатант, содержащий РНК, в чистую пробирку.
4. Элюат, содержащий РНК, рекомендуется использовать в течение дня для анализа, до анализа хранить при +4 °C. Если анализ РНК планируется провести в другой день, то раствор РНК хранить при -20 °C.
   Примечание: Анализ выделенной РНК можно провести с помощью ОТ-ПЦР в реальном времени.
   Примечание: Концентрацию выделенной РНК нельзя определить с помощью УФспектрометрии, рекомендуется использовать флуориметрические методы определения концентрации РНК.

Протокол выделения РНК. Автоматический способ. Auto-Pure96 (Allsheng)

1. Планшет, позиция № 2. Лизис. Добавить в лунку планшета 700 мкл ранее подготовленной смеси, содержащей буфер для лизиса LB и магнитные частицы (см. раздел «Перед началом работы»). Затем 100 мкл физраствора или транспортной среды после инкубации ватной палочки с соскобом или мазком эпителиальных клеток.
2. Планшет, позиция № 3. Промывка. Добавить в лунку планшета 500 мкл буфера для промывки WB.
3. Планшет, позиция № 8. Элюция РНК. Добавить в лунку планшета 100 мкл буфера для элюции EB.
   Примечание: Буфер для элюции – вода, очищенная от РНКаз.
4. Аккуратно поместить гребёнку в планшет на позиции №2, содержащий буфер для лизиса LB и образец.
5. Запустить программу «BAmag_T» на станции Auto-Prep96 (Allsheng).
   Примечание: Файл «BAmag_T.txt» с программой для станции Auto-Prep96 (Allsheng) можно получить следующими способами:
   • самостоятельно загрузить на сайте компании ООО «Биолабмикс» (www.biolabmix.ru), для удобства в поисковой строке указать каталожный номер продукта (MRP100);
   • связаться с сотрудниками отдела продаж компании ООО «Биолабмикс» (sales@biolabmix.ru, тел. 8-800-600-88-76).
6. После завершения программы выделенная РНК будет находиться в планшете на позиции №8.
7. Элюат, содержащий РНК, рекомендуется использовать в течение дня для анализа, до анализа хранить при +4 °C. Если анализ РНК планируется провести в другой день, то раствор РНК хранить при -20 °C.
   Примечание: Анализ выделенной РНК можно провести с помощью ОТ-ПЦР в реальном времени.
   Примечание: Концентрацию выделенной РНК нельзя определить с помощью УФспектрометрии, рекомендуется использовать флуориметрические методы определения концентрации РНК.

Протокол выделения РНК. Автоматический способ. KingFisher Flex (ThermoScientific)

1. Планшет 1. Лизис. Добавить в лунку планшета 700 мкл ранее подготовленной смеси, содержащей буфер для лизиса LB и магнитные частицы (см. раздел «Перед началом работы»). Затем 100 мкл физраствора или транспортной среды после инкубации ватной палочки с соскобом или мазком эпителиальных клеток.
2. Планшет 2. Промывка. Добавить в лунку планшета 500 мкл буфера для промывки WB.
3. Планшет 3. Элюция РНК. Добавить в лунку планшета 100 мкл буфера для элюции EB.
   Примечание: Буфер для элюции – вода, очищенная от РНКаз.
4. Аккуратно поместить гребёнку в планшет 1, содержащий буфер для лизиса LB и образец.
5. Запустить программу «BKmag_T» на станции KingFisher Flex (ThermoScientific).
   Примечание: Файл «BKmag_T.bdz» с программой для станции KingFisher Flex (ThermoScientific) можно получить следующими способами:
   • самостоятельно загрузить на сайте компании ООО «Биолабмикс» (www.biolabmix.ru), для удобства в поисковой строке указать каталожный номер продукта (MRP100);
   • связаться с сотрудниками отдела продаж компании ООО «Биолабмикс» (sales@biolabmix.ru, тел. 8-800-600-88-76).
6. После завершения программы выделенная РНК будет находиться в планшете 3.
7. Элюат, содержащий РНК, рекомендуется использовать в течение дня для анализа, до анализа хранить при +4 °C. Если анализ РНК планируется провести в другой день, то раствор РНК хранить при -20 °C.
   Примечание: Анализ выделенной РНК можно провести с помощью ОТ-ПЦР в реальном времени.
   Примечание: Концентрацию выделенной РНК нельзя определить с помощью УФспектрометрии, рекомендуется использовать флуориметрические методы определения концентрации РНК.

Условия хранения:

Набор для выделения РНК хранить при температуре от +15 до +25 °C. Магнитные частицы хранить при температуре 2-8 °C. Срок годности см. на упаковке.

Условия транспортировки:

Транспортировку набора, производить при температуре от +15 до +25 °C.

Допускается транспортирование при температуре не выше +25°C в течение 14 суток.