БиоМастер HS-qPCR (2×) 2040 реакций

Набор БиоМастер HS-qPCR (2×) содержит 2× реакционную смесь БиоМастер HSqPCR (2×) и стерильную воду. 2× реакционная смесь БиоМастер HS-qPCR (2×) предназначена для проведения количественного ПЦР в режиме реального времени c использованием флуоресцентно-меченых зондов. В состав БиоМастер HS-qPCR (2×) входят все необходимые компоненты ПЦР (исключая ДНК-матрицу, праймеры и зонд):

• высокопроцессивная рекомбинантная HS-Taq ДНК-полимераза;
• смесь дезоксинуклеозидтрифосфатов;
• ПЦР-буфер;
• Mg²⁺

Смесь оптимизирована для проведения эффективной и воспроизводимой ПЦР c “горячим стартом” в режиме реального времени с образцами геномной, плазмидной и вирусной ДНК. В состав смеси входят добавки, повышающие время полужизни и процессивность HS-Taq ДНК-полимеразы за счет повышения её стабильности во время ПЦР. Реакционная смесь БиоМастер HS-qPCR (2×) не содержит вещества, влияющие на температуры отжига праймеров и характеристики плавления матрицы.

ДНК-полимераза, входящая в состав смеси, неактивна при комнатной температуре. Для её активации необходим прогрев реакционной смеси при 95 °С в течение 5 мин. Представленная форма набора для проведения ПЦР экономит время и снижает вероятность контаминации за счет малого числа шагов пипетирования.

Состав набора

Состав БиоМастер HS-qPCR (2×)

100 mM Трис-HCl, рН 8,5, 100 mM KCl, 0,4 мМ каждого нуклеозидтрифосфата, 10 мМ MgCl₂, 0,1 ед. акт./мкл HS-Taq ДНК-полимеразы, 0,025% Tween 20, стабилизаторы Taq ДНК-полимеразы.

Область применения

• ПЦР c “горячим стартом” в режиме реального времени с применением флуоресцентно-меченых зондов;
• Обычная ПЦР;
• Высоковоспроизводимая ПЦР;
• Мультиплексная ПЦР;
• Генотипирование.

Свойства полимеразы

Рекомбинантная HS-Taq ДНК-полимераза обладает 5´-3´ ДНК-зависимой полимеразной активностью и 5’-3’ экзонуклеазной активностью нативной Taq ДНК-полимеразы из Thermus aquaticus. Скорость продвижения Taq ДНКполимеразы зависит от сложности ДНК-матрицы и составляет примерно 1 т.п.о./мин. Рекомбинантная HS-Taq ДНК-полимераза идеально подходит для стандартной ПЦР и ПЦР в режиме реального времени.

Свойства реакционной смеси

• Реакционная смесь неактивна при комнатной температуре благодаря технологии “горячий старт” и активируется после инкубации при 95 °С в течение 5 мин;
• Смесь оптимизирована для специфичной работы HS-Taq ДНК-полимеразы, длительного хранения (хранение БиоМастер HS-qPCR (2×) в течение месяца при комнатной температуре не снижает эффективность ПЦР), многократного замораживания-размораживания.

Преимущества использования

• Фермент с “горячим стартом” повышает специфичность, чувствительность и выход реакции;
• Для активации HS-Taq ДНК-полимеразы требуется не более 5 мин;
• Высокие селективность и выход реакции;
• Сокращается время на подготовку реакции;
• Снижается вероятность контаминации при смешивании компонентов ПЦР;
• Стандартизируются условия постановки однотипных реакций (снижается погрешность при смешивании компонентов ПЦР в разных экспериментах);
• Минимизируются трудозатраты.

Ограничения к использованию

Не рекомендуется использовать для ПЦР в реальном времени с интеркалирующими красителями.

Для таких приложений следует использовать наборы БиоМастер qPCR ROX SYBR Blue (2×) или БиоМастер HS-qPCR SYBR Blue (2×).

Протокол выполнения амплификации

1. Разморозить реакционную смесь и тщательно перемешать.
2. В тонкостенные пробирки для ПЦР добавить следующие компоненты из расчета объема одной реакционной смеси 25 мкл:
   

   Компонент	Объем	Конечная концентрация
   БиоМастер HS-qPCR (2×)	12,5	1×
   Прямой праймер	переменный	0,1-600 нМ
   Обратный праймер	переменный	0,1-600 нМ
   Зонд	переменный	0,1-300 нМ
   ДНК-матрица	переменный	1 пг-1 мкг
   Стерильная вода	до 25 мкл

3. Осторожно перемешать и сбросить капли, используя центрифугу.
4. Провести ПЦР, используя рекомендованные ниже температурные условия:
   

   Шаг	Температура, °С	Время инкубации	Количество циклов
   Предварительная денатурация	95	5 мин	1
   Денатурация	95	5-15 сек	30-50
   Отжиг	50-68	5-15 сек
   Элонгация	58-72	5-30 сек

   
   Либо:
   

   Шаг	Температура, °С	Время инкубации	Количество циклов
   Предварительная денатурация	95	5 мин	1
   Денатурация	95	5-15 сек	30-50
   Отжиг/ элонгация	50-68	30-60сек

5. Результат проведения ПЦР отображается в виде кривых амплификации.

Условия хранения

Хранить в месте, защищенном от попадания света: при +25 °С - 7дней; при +4 °С - 4 месяца; при -20°С - 18 месяцев; не более 50 циклов замораживания-размораживания.

Условия транспортировки

Транспортируется в термоконтейнерах с охлаждающими элементами, допускается повышение температуры до температуры окружающей среды примтранспортировке до 10 дней.