БиоМастер HS-qPCR SYBR Blue(2×) 2040 реакций

Набор БиоМастер HS-qPCR SYBR Blue (2×) содержит 2× реакционную смесь БиоМастер HS-qPCR SYBR Blue (2×), 50 мМ раствор MgCl2 и стерильную воду. 2× реакционная смесь БиоМастер HS-qPCR SYBR Blue (2×) предназначена для проведения количественного ПЦР в режиме реального времени с использованием флуоресцентного красителя SYBR Green I. В состав БиоМастер HS-qPCR SYBR Blue (2×) входят все необходимые компоненты ПЦР (исключая ДНКматрицу и праймеры):

• высокопроцессивная рекомбинантная HS-Taq ДНК-полимераза;
• смесь дезоксинуклеозидтрифосфатов;
• ПЦР буфер;
• Mg²⁺ (3 мМ);
• SYBR Green I;
• инертный краситель.

Смесь оптимизирована для проведения эффективной и воспроизводимой ПЦР c “горячим стартом” в режиме реального времени с образцами геномной, плазмидной и вирусной ДНК. В состав смеси входят добавки, повышающие время полужизни и процессивность HS-Taq ДНК-полимеразы за счет повышения её стабильности во время ПЦР. Реакционная смесь БиоМастер HS-qPCR SYBR Blue (2×) содержит вещества, влияющие на температуры отжига праймеров и характеристики плавления матрицы, что позволяет повысить специфичность ПЦР и использовать матрицы со сложной пространственной структурой.

ДНК-полимераза, входящая в состав смеси, неактивна при комнатной температуре. Для её активации необходим прогрев реакционной смеси при 95°С в течение 5 мин. Инертный краситель в составе БиоМастер HS-qPCR SYBR Blue (2×) окрашивает её в голубой цвет и облегчает контроль за раскапыванием смеси при использовании многолуночных планшетов.

Представленная форма набора для проведения ПЦР экономит время и снижает вероятность контаминации за счет малого числа шагов пипетирования. Низкое содержание магния в реакционной смеси и пробирка со 50 мМ раствором MgCl₂ позволяют оптимизировать условия реакции под конкретную систему (праймеры/ матрица).

Состав набора

Состав БиоМастер HS-qPCR SYBR Blue (2×)

100 mM Трис-HCl, рН 8,5, 100 mM KCl, 0,4 мМ каждого нуклеозидтрифосфата, 3 мМ MgCl₂, 0,06 ед. акт./мкл Taq ДНК-полимеразы, 0,025% Tween 20, стабилизаторы HS-Taq ДНК-полимеразы, SYBR Green I и инертный краситель.

Область применения

• ПЦР в режиме реального времени с использованием интеркалирующего красителя SYBR Green I;
• Обычная ПЦР;
• Высоковоспроизводимая ПЦР;
• Генотипирование.

Свойства полимеразы

Рекомбинантная Taq ДНК-полимераза обладает 5´-3´ ДНК-зависимой полимеразной активностью и 5’-3’ экзонуклеазной активностью нативной HSTaq ДНК-полимеразы из Thermus aquaticus. Скорость продвижения Taq ДНКполимеразы зависит от сложности ДНК-матрицы и составляет примерно 2 т.п.о./мин. Рекомбинантная HS-Taq ДНК-полимераза идеально подходит для стандартной ПЦР и ПЦР в режиме реального времени.

SYBR Green I

SYBR Green I - флуоресцентный интеркалирующий краситель для количественной и качественной детекции ПЦР-продуктов в ходе ПЦР в режиме реального времени. SYBR Green I обеспечивает простой и экономичный вариант для детекции и количественного определения ПЦР-продуктов в ходе ПЦР в режиме реального времени (ПЦР-РВ) без необходимости использования специфичных флуоресцентных зондов. В ходе амплификации краситель SYBR Green I встраивается в малую бороздку ДНК ПЦР-продуктов и испускает более сильный по сравнению с несвязанным красителем флуоресцентный сигнал. Максимумы поглощения и испускания SYBR Green I 494 нм и 521 нм соответственно, что позволяет использовать его со всеми известными на сегодняшний день приборами для проведения ПЦР в режиме реального времени.

Инертный краситель

Инертный краситель в составе БиоМастер HS-qPCR SYBR Blue (2×) не снижает эффективность ПЦР и помогает контролировать процесс раскапывания многолуночных планшетов. Максимум абсорбции голубой краски соответствует 615 нм.

Свойства реакционной смеси

• Реакционная смесь оптимизирована для проведения ПЦР в режиме реального времени;
• Смесь содержит вещества, увеличивающие ее срок хранения (хранение БиоМастер HS-qPCR SYBR Blue (2×) в течение месяца при комнатной температуре не снижает эффективность ПЦР), многократного замораживания-размораживания.

Преимущества использования

• Фермент с “горячим” стартом повышает специфичность, чувствительность и выход реакции;
• Для активации HS-Taq ДНК-полимеразы требуется не более 5 мин;
• Смесь окрашена для облегчения раскапывания;
• Сокращается время на подготовку реакции;
• Снижается вероятность контаминации при смешивании компонентов ПЦР;
• Стандартизируются условия постановки однотипных реакций (снижается погрешность при смешивании компонентов ПЦР в разных экспериментах).

Ограничения к использованию

Не рекомендуется использовать для ПЦР в реальном времени с флуоресцентномеченными зондами. Для таких приложений следует использовать БиоМастер HS-qPCR (2×).

Протокол проведения амплификации

1. Разморозить реакционную смесь и тщательно перемешать.
2. В тонкостенные пробирки для ПЦР добавить следующие компоненты из расчета объема одной реакционной смеси 25 мкл:
   

   Компонент	Объем	Конечная концентрация
   БиоМастер HS-qPCR SYBR Blue (2×)	12,5	1×
   Прямой праймер	переменный	0,1-600 нМ
   Обратный праймер	переменный	0,1-600 нМ
   ДНК-матрица	переменный	1 пг-1 мкг
   Стерильная вода	до 25 мкл

3. Осторожно перемешать и сбросить капли, используя центрифугу.
4. Провести ПЦР, используя рекомендованные ниже температурные условия:
   

   Шаг	Температура, °С	Время инкубации	Количество циклов
   Предварительная денатурация	95	5 мин	1
   Денатурация	95	5-15 сек	25-50
   Отжиг	50-68	5-15 сек
   Элонгация	58-72	10-30 сек
   Кривая температур плавления	65-95		1

5. Результат проведения ПЦР отображается в виде кривых амплификации.
   Примечание. Мониторинг ПЦР в реальном времени можно проводить при 72 °С, в случае отсутствия неспецифических продуктов (праймер-димеров). Если образуются неспецифические продукты с Тm1 ниже, чем Тm2 целевого продукта, то мониторинг реакции проводят при температуре между Тm1 и Тm2.

Условия хранения

Хранить в месте, защищенном от попадания света: при +25 °С - 7дней; при +4 °С - 4 месяца; при -20 °С - 18 месяцев; не более 50 циклов замораживания-размораживания.

Условия транспортировки

Транспортируется в термоконтейнерах с охлаждающими элементами, допускается повышение температуры до температуры окружающей среды при транспортировке до 10 дней.