БиоМастер HS-Taq ПЦР-Color (2×) 1020 реакций

Набор БиоМастер HS-Taq ПЦР-Color (2×) содержит 2× реакционную смесь БиоМастер HS-Taq ПЦР-Color (2×), 50 мМ MgCl2 и стерильную воду. 2× реакционная смесь БиоМастер HS-Taq ПЦР-Color (2×) предназначена для проведения ПЦР-анализа большого количества образцов. В состав БиоМастер HS-Taq ПЦР-Color (2×) реакционной смеси входят все необходимые компоненты для проведения ПЦР (исключая ДНК-матрицу и праймеры):

• высокопроцессивная рекомбинантная HS-Taq ДНК-полимераза;
• смесь дезоксинуклеозидтрифосфатов;
• ПЦР-буфер;
• Mg²⁺;
• красители.

Смесь оптимизирована для проведения эффективной и воспроизводимой ПЦР c “горячим стартом”. В состав смеси входят добавки, повышающие время полужизни и процессивность HS-Taq ДНК-полимеразы за счет повышения её стабильности во время ПЦР. Реакционная смесь БиоМастер HS-Taq ПЦР-Color (2×) химически стабильна, инертна и не меняет оптимальной температуры отжига праймеров или характеристики плавления матрицы.

ДНК-полимераза, входящая в её состав, неактивна при комнатной температуре. Для её активации необходим прогрев реакционной смеси при 95 °С в течение 5 мин. Входящий в набор раствор MgCl2 позволяет легко оптимизировать реакционную смесь под конкретную систему матрица-праймеры.

Представленная форма набора для проведения ПЦР экономит время и снижает вероятность контаминации за счет малого числа шагов пипетирования.

Добавленные красители и повышенная вязкость раствора позволяют наносить реакционную смесь сразу на гель.

Состав набора

Состав БиоМастер HS-Taq ПЦР-Color (2×)

100 мM Трис-НCl, рН 8,5 (при 25 °С), 100 мM KCl, 0,4 мМ каждого дезоксинуклеозидтрифосфата, 4 мМ MgCl2, 0.06 ед. акт./мкл Taq ДНКполимеразы, 0,2% Tween 20, стабилизаторы HS-Taq ДНК-полимеразы и красители.

Область применения

• ПЦР с “горячим стартом”;
• высокопроизводительная ПЦР;
• обычная ПЦР с высокой воспроизводимостью;
• наработка ПЦР-продуктов для ТА-клонирования
• ОТ-ПЦР.

Свойства полимеразы

Рекомбинантная HS-Taq ДНК-полимераза обладает 5´-3´ ДНК-зависимой полимеразной активностью и 5’-3’ экзонуклеазной активностью нативной Taq ДНК-полимеразы из Thermus aquaticus. Скорость продвижения Taq ДНКполимеразы зависит от сложности ДНК-матрицы и составляет примерно 2 т.п.о./мин. Рекомбинантная HS-Taq ДНК-полимераза идеально подходит для стандартной ПЦР с матрицы до 5 т.п.о.

Свойства реакционной смеси

• Смесь оптимизирована для специфичной работы HS-Taq ДНК-полимеразы, длительного хранения (хранение БиоМастер HS-Taq ПЦР-Color (2×) в течение 30 дней при комнатной температуре не снижает эффективность ПЦР), многократного замораживания-размораживания;
• Смесь содержит красители, не влияющие на работу полимеразы, и компоненты, увеличивающие плотность пробы для удобства нанесения на гель.

Примечание: Подвижность красителей в 0,5 – 1,5% агарозном геле

Преимущества использования

• Фермент с “горячим стартом” повышает специфичность, чувствительность и выход реакции.
• Для активации HS-Taq ДНК-полимеразы требуется не более 5 мин.
• Сокращается время на подготовку реакции.
• Снижается вероятность контаминации при смешивании компонентов ПЦР.
• Стандартизируются условия постановки однотипных реакций (снижается погрешность при смешивании компонентов ПЦР в разных экспериментах).
• Облегчается стадия нанесения на гель. Благодаря высокой плотности смеси добавления в пробу буфера для нанесения не требуется.
• Возможность ТА-клонирования продуктов ПЦР за счет выступающих на концах амплифицированных фрагментов ДНК дезоксиаденозиновых остатков.

Ограничения к использованию

• Не рекомендуется использовать для ампликонов длиной свыше 5 т.п.о.
• Из-за содержания красителя смесь БиоМастер HS-Taq ПЦР-Color (2×) не может использоваться для ПЦР в режиме реального времени и других приложений, требующих измерения оптического поглощения или флуоресценции пробы. Для таких приложений следует использовать смесь БиоМастер qPCR (2×) и БиоМастер qPCR SYBR Blue (2×).

Протокол выполнения амплификации

1. Разморозить реакционную смесь, осторожно и тщательно перемешать.
2. В тонкостенные пробирки для ПЦР добавить следующие компоненты из расчета объема одной реакционной смеси 50 мкл:
   

   Компонент	Объем	Конечная концентрация
   БиоМастер HS-Taq ПЦР-Color (2×)	25	1×
   Прямой праймер	переменный	0,1-600 нМ
   Обратный праймер	переменный	0,1-600 нМ
   ДНК-матрица	переменный	1 пг-1 мкг
   Стерильная вода	До 50 мкл

3. Осторожно перемешать и сбросить капли, используя центрифугу.
   Примечание: в случае использования амплификатора без греющейся крышки, добавить в каждую пробирку каплю (25 - 35 мкл) минерального масла.
   Примечание: Готовую реакционную смесь следует быстро переместить в предварительно прогретый до 95 °C амплификатор.
4. Провести ПЦР, используя рекомендованный режим:
   

   Шаг	Температура, °С	Время инкубации	Количество циклов
   Предварительная денатурация	95	5 мин	1
   Денатурация	95	5-20 сек	25-50
   Отжиг	50-68 (Tm-5)	5-30 сек
   Элонгация	72	0,5-1 мин/т.п.о.
   Финальная элонгация	72	5-15 мин	1

   
   Tm - температура плавления дуплекса матрица/праймер определяется структурой праймеров. Для приблизительного расчета Tm можно воспользоваться формулой: Tm (°C) = 2 х (A+T) + 4 х (G+C).
5. После проведения ПЦР проанализировать продукты амплификации электрофорезом. Пробы наносятся на гель без добавления буфера для нанесения.

Примечание: для разделения продуктов реакции электрофорезом мы рекомендуем использовать 1 х TАЕ буфер с бромистым этидием.

Условия хранения

Хранить в месте, защищенном от попадания света: при +25 °С - 7дней; при +4 °С - 4 месяца; при -20 °С - 18 месяцев; не более 50 циклов замораживания-размораживания.

Условия транспортировки

Транспортируется в термоконтейнерах с охлаждающими элементами, допускается повышение температуры до температуры окружающей среды при транспортировке до 10 дней.