• Напишите нам
  • mail@snablab.ru
+7(495)660-35-58 Перезвоните мне
Пн. - Чт.: с 9.00 до 18.00
Пт.: с 9.00 до 17.00

БиоМастер ОТ-ПЦР-РВ (2×)

Наличие товара: Под заказ
Артикул: RM03-400
Бесплатная
Доставка
Гарантия
Возврата
Онлайн
Поддержка
i
  • Самовывоз - бесплатно;
  • Отправка до Транпортной компании - бесплатно;
    (Деловые линии, ЖелДорЭкспедиция, ПЭК, Nord Will, СДЭК)

Доставка до порога (без учета погрузо-разгрузочных работ) по Москве и МО (не более 15км от МКАД):

  • при заказе от 20 000 руб - бесплатно;
  • при заказе от 10 000 руб - от +1 500 руб;

Подробнее о доставке.

Цена по запросу

Набор реагентов БиоМастер ОТ-ПЦР-РВ (2×) содержит 2× буфер для ОТ-ПЦР-РВ, содержащий все необходимые компоненты (за исключением РНК матрицы и праймеров); БиоМастер-микс и Воду, обработанную ДЭПК. Набор предназначен для проведения обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (ОТ-ПЦР РВ) с флуоресцентными зондами одношаговым методом.

В состав БиоМастер-микс входит M-MuLV –RH и HS-Taq ДНК-полимераза в оптимальном соотношении для протекания обеих реакций.

M-MuLV –RH – генетически модифицированная обратная транскриптаза (ревертаза) вируса лейкемии мышей (M-MuLV). Фермент проявляет РНК- и ДНКзависимую полимеразную активность, но лишен активности РНКазы Н. Ревертаза M-MuLV –RH обладает повышенной термостойкостью и проявляет активность до 50°С.

HS-Taq ДНК-полимераза, представляет собой рекомбинантную Taq ДНКполимеразу, инактивированную специфическими моноклональными антителами.

HS-Taq ДНК-полимераза неактивна при температуре до 70°С. Активация осуществляется на первом цикле ПЦР при короткой 5-и минутной инкубации при 95°С. Рекомбинантная HS-Taq ДНК-полимераза обладает 5´-3´ ДНК-зависимой полимеразной активностью и 5’-3’ экзонуклеазной активностью нативной Taq ДНК-полимеразы из Thermus aquaticus. Рекомбинантная HS-Taq ДНКполимераза идеально подходит для стандартной ПЦР с матрицы до 5 т.п.о.

2× буфер для ОТ-ПЦР-РВ оптимизирован для эффективного протекания как ОТ, так и ПЦР.

Состав набора

Каталожный номер 2× буфер для ОТ-ПЦР-РВ 25× БиоМастермикс ДМСО Вода, обработанная ДЭПК Кол-во реакций по 25 мкл
RM03-80 2 × 0,5 мл 1 × 80 мкл 0,2 мл 2 × 0,5 мл 80
RM03-400 4 × 1,25 мл 1 ×400 мкл 0,5 мл 3 × 1,8 мл 400

Состав 2× буфер для ОТ-ПЦР-РВ:

100 мM Трис-НCl, рН 8.3 (при 25 °C), 150 мM KCl, 0,6 мМ каждого дезоксинуклеозидтрифосфата, 8 мМ MgCl2, 8 мМ ДТТ, стабилизаторы и усилители ферментов.

Состав 25× БиоМастер-микс:

50 мМ Трис-HCl, pH 8.0 (при 25 °C), 100 мМ NaCl, 1 мМ ЭДТА, 5 мМ дитиотреитол, 50% (v/v) глицерин и 0.1 % (v/v) NP-40, ингибитор РНКаз, M-MuLV –RH ревертаза и HS-Taq ДНК-полимераза.

Применение

  • Анализ экспрессии генов
  • Одношаговая ОТ-ПЦР в режиме реального времени

Свойства реакционной смеси

  • Смесь оптимизирована для специфичной и эффективной работы M-MuLV –RH ревертазы и HS-Taq ДНК-полимеразы,
  • Обеспечивает длительное хранение (хранение БиоМастер ОТ-ПЦР-РВ (2×) в течение 2 дней при комнатной температуре и многократное замораживание - размораживание не снижает эффективность ОТ-ПЦР)
  • Смесь не содержит красители, что делает её универсальной.

Преимущества использования

  • Высокая специфичность;
  • Высокая чувствительность;
  • Простота и удобство в использовании;
  • Низкая ошибка пипетирования и вероятности кросс-контаминации;
  • Позволяет стандартизовать условия постановки однотипных реакций (снижается погрешность при смешивании компонентов ПЦР в разных экспериментах);
  • Возможность ТА клонирования продуктов ПЦР за счет выступающих на концах амплифицированных фрагментов ДНК дезоксиаденозиновых остатков.

Ограничения к использованию

Не рекомендуется использовать для ампликонов длиной свыше 5 т.п.о.

Протокол

Рекомендуем перед началом работ ознакомиться с правилами и рекомендациями, приведенными в описании к набору на сайте http://biolabmix.ru/catalog

  1. Разморозить 2× буфер для ОТ-ПЦР-РВ и тщательно перемешать.
  2. Поместить тонкостенные пробирки для ПЦР в лед и добавить следующие компоненты из расчета объема одной реакционной смеси 25 мкл:
    Компонент Объем Конечная концентрация
    2× смесь для ОТ-ПЦР-РВ 12,5 мкл
    25× БиоМастер-микс 1 мкл  
    Прямой праймер переменный 0,1 – 600 нМ
    Обратный праймер переменный 0,1 – 600 нМ
    Зонд переменный 0,1 – 300 нМ
    РНК-матрица переменный 1 пг – 1 мкг
    Стерильная вода до 25 мкл  

    Примечание: в случае амплификации матриц, имеющих сложную пространственную структуру, допускается добавление ДМСО от 1 до 5% от конечного объема реакционной смеси. При этом учитывайте изменение Тm праймеров при составлении программы.

    Примечание: в зависимости от копийности и сложности гена добавляемый объем БиоМастер-микс может варьироваться от 0,5 до 2 мкл на реакцию объемом 25 мкл.

  3. Осторожно перемешайте и сбросьте капли, используя центрифугу.
  4. Проведите ПЦР, используя один из рекомендованных режимов:
    Шаг Температура, °С Время инкубации Количество циклов
    Обратная транскрипция 45 10-30 мин 1
    Предварительная денатурация 95 5 мин 1
    Денатурация 95 10-20 сек 30-50
    Отжиг 50 – 68 (Tm-5) 10-20 сек
    Элонгация 72 0,5-1 мин/т.п.о.

    Либо:

    Шаг Температура, °С Время инкубации Количество циклов
    Обратная транскрипция 45 10-30 мин 1
    Предварительная денатурация 95 5 мин 1
    Денатурация 95 15 сек 30-50
    Отжиг/ Элонгация 50 – 68 1 мин
  5. Результат проведения ПЦР отображается в виде кривых амплификации.

Оптимизация условий реакции

  1. В случае необходимости, объем реакции можно варьировать от 10 до 50 мкл, пропорционально изменяя количество всех компонентов.
  2. Для облегчения прохождения участков матрицы, содержащей GC-богатые участки и участки со сложной вторичной структурой, возможно увеличить температуру до 50°С и/или добавить реагенты, способствующие расплавлению вторичной структуры нуклеиновых кислот (например, ДМСО).

Условия хранения:

Хранить в месте, защищенном от попадания света: при +4 °С – 3 недели; при - 20°С – 1 год; не более 50 циклов замораживания-размораживания

Условия транспортировки:

Транспортировка в термоконтейнерах с охлаждающими элементами, допускается повышение температуры до температуры окружающей среды при транспортировке до 7 дней.

Вы смотрели