БиоМастер RNAscribe RT Minus (5×) 100 реакций

Набор БиоМастер RNAscribe RT Minus (5×) предназначен для синтеза первой цепи кДНК при проведении двухэтапной количественной ОТ-ПЦР. В набор входит готовая смесь БиоМастер RNAscribe RT Minus (5×), включающая: термостабильную ревертазу RNAscribe и ингибитор РНКаз для защиты РНК-матрицы от разрушения, а также все необходимые для проведения обратной транскрипции реагенты. Кроме того, реагент содержит инертный синий краситель для визуального контроля при постановке реакции. Cмесь БиоМастер RNAscribe RT Minus (5×) не содержит случайного гексапраймера и oligo(dT)16 праймера.

Объем исходного материала для проведения реакции может варьировать от единичных копий РНК до 1 мкг без потери качества обратной транскрипции.

БиоМастер RNAscribe RT Minus (5×) может проводить синтез кДНК в температурном интервале 42 – 65°С. Для большинства приложений оптимальной является температура 55°С. Формат набора позволяет значительно сократить время на первую стадию в двухстадийной ОТ-ПЦР.

В состав набора входит Контроль-ОТ (5×), который представляет собой смесь реагентов полностью идентичную по составу смеси БиоМастер RNAscribe RT Minus (5×), но БЕЗ фермента.

Состав набора

Состав БиоМастер RNAscribe RT Minus (5×):

100 мM Трис-НCl, рН 8.3 (при 25 °C), 250 мM KCl, 2,5 мМ каждого дезоксинуклеозидтрифосфата, 20 мМ MgCl2, 2,5 мМ TCEP, стабилизаторы и усилители фермента, обратная транскриптаза RNAscribe RT, ингибитор РНКаз, инертный краситель.

Применение

• Синтез первой цепи кДНК для ОТ-ПЦР и ОТ-ПЦР в режиме реального времени;
• Синтез кДНК для клонирования;
• Синтез кДНК сложных и длинных матриц;
• Получение меченых кДНК зондов для микрочипов (microarray);

Свойства реакционной смеси

• Эффективная работа в широком диапазоне температур (42 – 65°С)
• Стабильность при хранении (до одного месяца при + 4°С);
• Эффективное покрытие (оптимальное соотношение неспецифических праймеров).

Преимущества использования

• Смесь окрашена для облегчения раскапывания;
• Высокая чувствительность (10 пг – 1 мкг РНК);
• Простота и удобство в использовании;
• Низкая ошибка пипетирования;
• Позволяет стандартизовать условия постановки однотипных реакций (снижается погрешность при смешивании компонентов ПЦР в разных экспериментах);

Протокол

Рекомендуем перед началом работ ознакомиться с правилами и рекомендациями, приведенными в описании к набору на сайте.

Общие рекомендации

БиоМастер RNAscribe RT Minus (5×) может проводить синтез кДНК в температурном интервале 42 – 65°С. Для большинства приложений оптимальной является температура 55°С.

Мы рекомендуем использовать 1 мкл реакционной смеси в качестве матрицы для последующей ПЦР. При необходимости, можно использовать в качестве матрицы до 25% от объема ПЦР-смеси неразведенной кДНК. Для удобства работы, можно развести полученную кДНК после реакции в 5 раз (до 100 мкл) безнуклеазной водой и брать в последующую ПЦР по 5 мкл.

Обратная транскрипция (синтез первой цепи кДНК)

1. Аккуратно перемешайте реакционную смесь БиоМастер RNAscribe RT Minus (5×) и сбросьте капли.
2. Замешайте реакционную смесь для получения первичной цепи кДНК, как описано ниже:

Инкубируйте в амплификаторе по следующему протоколу:

*указано время для получения коротких фрагментов с последующим анализом с помощью ПЦР в режиме реального времени. Если планируется анализировать более длинные фрагменты, рекомендуем увеличить время до 30-50 мин.

Условия хранения:

Хранить при температуре -20°С – 1 год; не более 30 циклов замораживания-размораживания.

Фермент устойчив к инкубации при комнатной температуре (до 7 дней).

Условия транспортировки

Транспортировать в термоконтейнерах с охлаждающими элементами.

Допускается повышение температуры до температуры окружающей среды при транспортировке до 7 дней.