
Доставка
Возврата
Поддержка
- Самовывоз - бесплатно;
- Отправка до Транпортной компании - бесплатно;
(Деловые линии, ЖелДорЭкспедиция, ПЭК, Nord Will, СДЭК)
Доставка до порога (без учета погрузо-разгрузочных работ) по Москве и МО (не более 15км от МКАД):
- при заказе от 20 000 руб - бесплатно;
- при заказе от 10 000 руб - от +1 500 руб;
Подробнее о доставке.
Набор БиоМастер RNAscribe RT Plus (5×) предназначен для синтеза первой цепи кДНК при проведении двухэтапной количественной ОТ-ПЦР. В набор входит готовая смесь БиоМастер RNAscribe RT Plus (5×), включающая: термостабильную ревертазу RNAscribe и ингибитор РНКаз для защиты РНК-матрицы от разрушения, а также все необходимые для проведения обратной транскрипции реагенты.
Максимальная представленность всех последовательностей РНК в виде кДНК обеспечивается присутствием случайного гексапраймера и oligo(dT)16 праймеров в оптимальном соотношении. Кроме того, реагент содержит инертный синий краситель для визуального контроля при постановке реакции. Объем исходного материала для проведения реакции может варьировать от единичных копий РНК до 1 мкг без потери качества обратной транскрипции.
БиоМастер RNAscribe RT Plus (5×) может проводить синтез кДНК в температурном интервале 42 – 65°С. Для большинства приложений оптимальной является температура 55°С. Формат набора позволяет значительно сократить время на первую стадию в двухстадийной ОТ-ПЦР.
В состав набора входит Контроль-ОТ (5×), который представляет собой смесь реагентов полностью идентичную по составу смеси БиоМастер RNAscribe RT Plus (5×), но БЕЗ фермента.
Состав набора
Компонент | Каталожный номер (количество реакций по 20 мкл) | |
R02-100 | R02-400 | |
БиоМастер RNAscribe RT Plus (5×) | 1 × 400 мкл | 2 × 800 мкл |
Контроль-ОТ (5×) | 1 × 40 мкл | 1 × 160 мкл |
Вода, обработанная ДЭПК | 1 × 1,8 мл | 4 × 1,8 мл |
Состав БиоМастер RNAscribe RT Plus (5×):
100 мM Трис-НCl, рН 8.3 (при 25 °C), 250 мM KCl, 2,5 мМ каждого дезоксинуклеозидтрифосфата, 20 мМ MgCl2, 2,5 мМ TCEP, стабилизаторы и усилители фермента, обратная транскриптаза RNAscribe RT, ингибитор РНКаз, инертный краситель, случайный гексапраймер и oligo(dT)16 праймер.
Применение
- Синтез первой цепи кДНК для ОТ-ПЦР и ОТ-ПЦР в режиме реального времени;
- Синтез кДНК для клонирования;
- Синтез кДНК сложных и длинных матриц;
- Получение меченых кДНК зондов для микрочипов (microarray);
Свойства реакционной смеси
- Эффективная работа в широком диапазоне температур (42 – 65°С)
- Стабильность при хранении (до одного месяца при + 4°С);
- Эффективное покрытие (оптимальное соотношение неспецифических праймеров).
Преимущества использования
- Смесь окрашена для облегчения раскапывания;
- Высокая чувствительность (10 пг – 1 мкг РНК);
- Простота и удобство в использовании;
- Низкая ошибка пипетирования;
- Позволяет стандартизовать условия постановки однотипных реакций (снижается погрешность при смешивании компонентов ПЦР в разных экспериментах);
Протокол
Рекомендуем перед началом работ ознакомиться с правилами и рекомендациями, приведенными в описании к набору на сайте http://biolabmix.ru
Общие рекомендации
БиоМастер RNAscribe RT Plus (5×) может проводить синтез кДНК в температурном интервале 42 – 65°С. Для большинства приложений оптимальной является температура 55°С.
Мы рекомендуем использовать 1 мкл реакционной смеси в качестве матрицы для последующей ПЦР. При необходимости, можно использовать в качестве матрицы до 25% от объема ПЦР-смеси неразведенной кДНК. Для удобства работы, можно развести полученную кДНК после реакции в 5 раз (до 100 мкл) безнуклеазной водой и брать в последующую ПЦР по 5 мкл.
Обратная транскрипция (синтез первой цепи кДНК)
- Аккуратно перемешайте реакционную смесь БиоМастер RNAscribe RT Plus (5×) и сбросьте капли.
- Замешайте реакционную смесь для получения первичной цепи кДНК, как описано ниже:
Компонент | На одну реакцию (20 мкл) | Конечная концентрация |
БиоМастер RNAscribe RT Plus (5×) | 4 мкл | 1× |
Образец РНК | переменный | до 1 мкг |
Вода, обработанная ДЭПК | До 20 мкл |
Инкубируйте в амплификаторе по следующему протоколу:
Шаг | Температура, °С | Время, мин |
Отжиг праймеров | 25 | 2 |
Синтез кДНК | 55 | 10* |
Инактивация | 95 | 1 |
*указано время для получения коротких фрагментов с последующим анализом с помощью ПЦР в режиме реального времени. Если планируется анализировать более длинные фрагменты, рекомендуем увеличить время до 30-50 мин.
Условия хранения:
Хранить при температуре -20°С – 1 год; не более 30 циклов замораживанияразмораживания.
Фермент устойчив к инкубации при комнатной температуре (до 7 дней).
Условия транспортировки
Транспортировать в термоконтейнерах с охлаждающими элементами.
Допускается повышение температуры до температуры окружающей среды при транспортировке до 7 дней.
Вы смотрели
Комментарии (0)