• Напишите нам
  • mail@snablab.ru
+7(495)660-35-58 Перезвоните мне
Пн. - Чт.: с 9.00 до 18.00
Пт.: с 9.00 до 17.00

Термолабильная щелочная фосфатаза 5000 е.а.

Наличие товара: Под заказ
Бесплатная
Доставка
Гарантия
Возврата
Онлайн
Поддержка
i
  • Самовывоз - бесплатно;
  • Отправка до Транпортной компании - бесплатно;
    (Деловые линии, ЖелДорЭкспедиция, ПЭК, Nord Will, СДЭК)

Доставка до порога (без учета погрузо-разгрузочных работ) по Москве и МО (не более 15км от МКАД):

  • при заказе от 20 000 руб - бесплатно;
  • при заказе от 10 000 руб - от +1 500 руб;

Подробнее о доставке.

Цена по запросу

Настоящий продукт является рекомбинантным ферментом – щелочной фосфатазой грамотрицательной бактерии Vibrio splendidus. Фермент имеет молекулярную массу ~58 кДа и проявляет каталитическую активность в гомодимерной форме [1]. Температурный диапазон работы фермента составляет от 15 до 37°С, однако для пролонгированных реакций рекомендуется использовать 15°C как наиболее оптимальную для стабильности фермента [2].

Термолабильная щелочная фосфатаза удаляет фосфаты с 5`- и 3`-концов ДНК, РНК и может быть использована вместо антарктической фосфатазы.

Область применения

Клонирование рестрикционных фрагментов.

Синтез мРНК.

Источник

Термолабильная щелочная фосфатаза выделена из штамма E.coli, содержащего плазмиду с клонированным геном щелочной фосфатазы грамотрицательной бактерии Vibrio splendidus.

Единицы активности

Одна единица активности соответствует количеству фермента, необходимому для гидролиза 1 μмоля пара-нитрофенилфосфата (PNPP) в 0,5 мл реакционной смеси за 15 мин при 25°C, в стандартном реакционном буфере (10 mM Tris-HCl (pH 9.0 при 25°C); 10 mM MgCl2; 100 mM NaCl; 1 mM DTT, 10 мМ PNPP).

Концентрация фермента и фасовки: 5000 е.а./мл.

Каталожный номер Название Количество Объем
E-12005 Термолабильная щелочная фосфатазаG 500 е.а. 100 мкл
Е-12050 5000 е.а. 1000 мкл

Буфер хранения

Фермент находится в растворе следующего состава: 25 мМ Трис (pH 8.0 при 25°C), 2 мМ MgCl2, 0,02 мМ ZnCl2, 50% глицерин.

Контроль качества

Каждая партия фермента тестируется на специфическую активность фермента, электрофоретическую чистоту в SDS-ПААГ, отсутствие неспецифической нуклеазной активности.

10х Стандартный реакционный буфер

10 mM Tris-HCl (pH 9.0 при 25°C); 10 mM MgCl2; 100 mM NaCl; 1 mM DTT (1 мл 10х буфера поставляется вместе с ферментом).

Типичные протокол дефосфорилирования гидролизованных плазмид.

  1. Для проведения реакции смешайте в пробирке указанные компоненты:
    • 2 мкл 10х стандартного реакционного буфера;
    • 1 мкг гидролизованной плазмидной ДНК (4-8 т.п.н.);
    • до 19 мкл воды, очищенной от нуклеаз;
    • 1 мкл (5 е. а.) термолабильной щелочной фосфатазы.
  2. Инкубируйте реакционную смесь при 37°С в течение часа.
  3. Для инактивации фермента прогрейте реакционную смесь при 65°С в течение 20 минут.
  4. Обработанная плазмидная ДНК может быть использована в дальнейших работах. При необходимости ДНК может быть дополнительно очищена с помощью общеизвестных методов, например, Набором для выделения ДНК и РНК из реакционных смесей (кат. № DR-10, DR-50, DR-250).

Инактивации фермента: прогрев при 65°С в течение 20 минут.

Условия хранения и транспортировки

Хранить при температуре –20°С.

Допускается транспортирование при температуре не выше +8°C в течение двух суток.

Ссылки

  1. Helland R., Larsen R. L., Ásgeirsson B. The 1.4 Å crystal structure of the large and cold-active Vibrio sp. alkaline phosphatase //Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Proteins and Proteomics. – 2009. – Т. 1794. – №. 2. – С. 297-308.
  2. Hauksson J. B., Andrésson Ó. S., Ásgeirsson B. Heat-labile bacterial alkaline phosphatase from a marine Vibrio sp //Enzyme and microbial technology. – 2000. – Т. 27. – №. 1-2. – С. 66-73.

Вы смотрели