
Доставка
Возврата
Поддержка
- Самовывоз - бесплатно;
- Отправка до Транпортной компании - бесплатно;
(Деловые линии, ЖелДорЭкспедиция, ПЭК, Nord Will, СДЭК)
Доставка до порога (без учета погрузо-разгрузочных работ) по Москве и МО (не более 15км от МКАД):
- при заказе от 20 000 руб - бесплатно;
- при заказе от 10 000 руб - от +1 500 руб;
Подробнее о доставке.
Настоящий продукт является рекомбинантным ферментом – щелочной фосфатазой грамотрицательной бактерии Vibrio splendidus. Фермент имеет молекулярную массу ~58 кДа и проявляет каталитическую активность в гомодимерной форме [1]. Температурный диапазон работы фермента составляет от 15 до 37°С, однако для пролонгированных реакций рекомендуется использовать 15°C как наиболее оптимальную для стабильности фермента [2].
Термолабильная щелочная фосфатаза удаляет фосфаты с 5`- и 3`-концов ДНК, РНК и может быть использована вместо антарктической фосфатазы.
Область применения
Клонирование рестрикционных фрагментов.
Синтез мРНК.
Источник
Термолабильная щелочная фосфатаза выделена из штамма E.coli, содержащего плазмиду с клонированным геном щелочной фосфатазы грамотрицательной бактерии Vibrio splendidus.
Единицы активности
Одна единица активности соответствует количеству фермента, необходимому для гидролиза 1 μмоля пара-нитрофенилфосфата (PNPP) в 0,5 мл реакционной смеси за 15 мин при 25°C, в стандартном реакционном буфере (10 mM Tris-HCl (pH 9.0 при 25°C); 10 mM MgCl2; 100 mM NaCl; 1 mM DTT, 10 мМ PNPP).
Концентрация фермента и фасовки: 5000 е.а./мл.
Каталожный номер | Название | Количество | Объем |
E-12005 | Термолабильная щелочная фосфатазаG | 500 е.а. | 100 мкл |
Е-12050 | 5000 е.а. | 1000 мкл |
Буфер хранения
Фермент находится в растворе следующего состава: 25 мМ Трис (pH 8.0 при 25°C), 2 мМ MgCl2, 0,02 мМ ZnCl2, 50% глицерин.
Контроль качества
Каждая партия фермента тестируется на специфическую активность фермента, электрофоретическую чистоту в SDS-ПААГ, отсутствие неспецифической нуклеазной активности.
10х Стандартный реакционный буфер
10 mM Tris-HCl (pH 9.0 при 25°C); 10 mM MgCl2; 100 mM NaCl; 1 mM DTT (1 мл 10х буфера поставляется вместе с ферментом).
Типичные протокол дефосфорилирования гидролизованных плазмид.
- Для проведения реакции смешайте в пробирке указанные компоненты:
- 2 мкл 10х стандартного реакционного буфера;
- 1 мкг гидролизованной плазмидной ДНК (4-8 т.п.н.);
- до 19 мкл воды, очищенной от нуклеаз;
- 1 мкл (5 е. а.) термолабильной щелочной фосфатазы.
- Инкубируйте реакционную смесь при 37°С в течение часа.
- Для инактивации фермента прогрейте реакционную смесь при 65°С в течение 20 минут.
- Обработанная плазмидная ДНК может быть использована в дальнейших работах. При необходимости ДНК может быть дополнительно очищена с помощью общеизвестных методов, например, Набором для выделения ДНК и РНК из реакционных смесей (кат. № DR-10, DR-50, DR-250).
Инактивации фермента: прогрев при 65°С в течение 20 минут.
Условия хранения и транспортировки
Хранить при температуре –20°С.
Допускается транспортирование при температуре не выше +8°C в течение двух суток.
Ссылки
- Helland R., Larsen R. L., Ásgeirsson B. The 1.4 Å crystal structure of the large and cold-active Vibrio sp. alkaline phosphatase //Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Proteins and Proteomics. – 2009. – Т. 1794. – №. 2. – С. 297-308.
- Hauksson J. B., Andrésson Ó. S., Ásgeirsson B. Heat-labile bacterial alkaline phosphatase from a marine Vibrio sp //Enzyme and microbial technology. – 2000. – Т. 27. – №. 1-2. – С. 66-73.
Вы смотрели
Комментарии ()