Набор праймеров с уникальными двусторонними индексами для мультиплексирования (платформа Illumina), 384 реак.

Набор Multiplexing Unique Dual Index Primers содержит смесь праймеров для мультиплексирования библиотек для секвенирования на платформе Illumina. Мультиплексирование NGS-библиотек позволяет загружать множество образцов на проточную ячейку, что снижает стоимость секвенирования.

Разработана эффективная система, позволяющая создавать индексы, последовательности которых отличаются минимум в 4 точках при длине в 8 нуклеотидов. Уникальные двусторонние индексирующие праймеры позволяют избежать такие часто встречающиеся проблемы при секвенировании как: «прыжки» индексов, кросс-контаминация индексов, неправильное распознавание индекса при прочтении, ошибки амплификации и ошибки демультиплексирования. Набор праймеров состоит из премиксов 96 уникальных пар индексирующих праймеров i5 и i7 в 96-ти луночном планшете.

Характеристики:

• Улучшенная идентификация образцов с системой различий индексов в 4 точках
• Последовательность каждого индекса отличается от другой как минимум по 4 точкам
• Различие в 4 точках повышает специфичность по сравнению с другими производителями, для которых различия составляют только в 3 точках
• Повышенная производительность мультиплексирования
• Премиксы 96 уникальных пар индексов i5 и i7
• Минимальное количество ошибок секвенирования таких как:
• «Прыжки» индексов
• Кросс-контаминация индексов
• Неправильное распознавание индексов при прочтении
• Ошибки амплификации
• Ошибки демультиплексирования

Выравнивание распределения 96 образцов с помощью двусторонних индексирующих праймеров.

96 библиотек были приготовлены с использованием наборов BioDynami NGS DNA Library Prep (Cat. # 30009) и BioDynami Multiplexing Unique Dual Index Primers (Cat. # 30075). Библиотеки были объединены в общий пул в равных концентрациях и просеквенированы на Illumina HiSeq 4000. Были проанализированы прочтения с 96 библиотек.

Идентификация «прыжков» индексов с помощью уникальных двусторонних индексов.

96 библиотек были приготовлены с использованием наборов BioDynami NGS DNA Library Prep (Cat. # 30009) и BioDynami Multiplexing Unique Dual Index Primers (Cat. # 30075). Библиотеки были объединены в общий пул в равных концентрациях и просеквенированы на Illumina HiSeq 4000. Прочтения всех библиотек были демультиплексированны и проанализированы.

• Демультиплексированны: правильно распознаны комбинации пар i5 и i7
• Идентифицированы «прыжки» индексов: правильное распознавание баркодов, но неверные комбинации i5 и i7
• Другое: не соответствует предыдущим категориям

Последовательность готовой проиндексированной библиотеки с указанием позиции индекса:

где NNNNNNN – это последовательность индекса i5 в направлении от 5’конца к 3’ концу; NNNNNNN – это последовательность индекса i7 в направлении от 5’конца к 3’ концу.