Типы лабораторных тестов для определения вирусной инфекции

Лабораторные тесты на определение вирусной инфекции позволяют определить не только сам вирус, но и понять на каком этапе заболевания находится человек. По соотношению иммуноглобулинов в крови человека можно сделать выводы не только о характере заболевания, но также и о картине заболевания и реакции организма на терапию. Так же по специфическому иммуноглобулину можно сделать выводы, на сколько успешной была вакцинация (проверить иммунный статус).

Основным методом для диагностики вирусной инфекции является метод ПЦР. Этот метод является “арбитражным методом”, то есть его используют, когда надо поставить точный диагноз.

Вирус содержит РНК, которая в свою очередь несет генетическую информацию. Суть метода ПЦР заключается в многократном копировании определенного фрагмента РНК вируса, свойственной именно искомому вирусу. С помощью специального прибора, амплификатора, происходит умножение копий вируса в геометрической прогрессии. Метод ПЦР позволяет выявить ничтожно малую концентрацию вируса в биоматериале. При правильном подборе реактивов и термического цикла метод может быть весьма чувствительным. Другими словами берётся проба  у человека, например мазок из носовой полости, с помощью специальных реактивов разрушают клетки, тем самым высвобождается РНК вируса. Биопробу с РНК вируса смешивают со специально подобранными компонентами (праймеры и нуклетиды). В дальнейшем в геометрической прогрессии умножается фрагмент вируса, если он присутствует в биопробе, и тем самым этого фрагмента становиться достаточно для его детекции. Так как в растворе для ПЦР присутствует также флюорофор, то в случае положительного результата, продукт реакции детектируется с помощью специального детектора.  Если же в образце нет искомого вируса, то он и не копируется и не определяется.

Метод ПЦР используют для подтверждения диагноза, а так же для проверки уже существующего. В теории метод ПЦР, как очень чувствительный метод, может обнаружить даже самое незначительное количество вируса, но на практики этот метод весьма чувствителен к контаминации и к качеству работы лаборанта. Так как метод еще и достаточно трудоемок, есть достаточно большая вероятность, что на каком-то из этапов может произойти загрязнение образца. Ложноотрицательный результат может быть из-за неверного взятия биоматериала, ложноположительный чаше всего из-за контаминации.

Зачастую, когда метод ПЦР дает отрицательный результат, а симптомы у пациента присутствуют, требуется повторить метод ПЦР через несколько дней, а так же провести исследования другими методом.

Так же распространенным методом тестирование на вирусную инфекцию является – определение антител к возбудителю. Это группа методов, основанная на биологическом принципе, что находясь в контакте с вирусом, человеческий организм вырабатывает антитела к этому вирусу, причем на каждом этапе заболевания вырабатываются специфические антитела, свойственны тем или иным иммунным процессам, происходящим в организме.

Как правило сразу после заражения вирусом в организме человека проявляются клетки иммунитета класса M (LgM). Это именно  тот иммунитет, который позволяет нам справляться с вирусом. Антитела класса М позволяют судить о тяжести течения болезни, так как со временем содержание иммуноглобулина класса М уменьшается, а иммуноглобулина класса  G нарастает. Это дает понять, что человек идет на поправку.

Если сравнивать два метода, ПЦР и методы, в основе которых лежит анализ антител, то можно привезти такой пример из жизни. Как охотник определяет, что в лесу есть то или иное животное. Метод ПЦР это когда находят шерсть, определяют кому она принадлежит, и тем самым делают вывод что в лесу есть искомое. Метод ИФА  - это когда в лесу находят след, определят кому принадлежит этот след, и делают вывод о наличии или отсутствии. С определенной долей допущений можно сказать, что метод ПЦР – это прямой метод анализа, а методы основаны на определении антител – косвенные.

Так антитела класса М снижаются в процессе заболевания, а антитела класса G наоборот нарастают. Антитела класса G как правило проявляются уже на 8 сутки заболевания.

Иммунотела класса M проявляются на 3 сутки после появления первичных симптомов, поэтому их называют иммунитетом первичного ответа. Антитела класса G проявляются на 8 – 10 день и сохраняются в организме длительное время, выполняя функцию гуморального иммунитета.

Для диагностики вирусов так же разработано множество экспресс тестов, которые можно отнести к группе Имуно-хроматографических тест систем. В основу этих методов лежит принцип тонкослойной хроматографии, основанный на реакции антигена (например частички капсида самого вируса) с соответствующим этому антигену антителу. Есть антиген встретился с антителом получается положительный результат. Методы, основанные на иммунохроматографии в основном не являются количественными, то есть показывает наличие вируса, но не дает представление о течении заболевания.

В случае положительного результата надо проверять методом ПЦР.

Плюсы метода ИХА – быстрота постановки и нет необходимости в использовании оборудования.

Минусы – высока вероятность ошибки.

В случае диагностики вирусных инфекций желательно совмещать несколько методов, например метод ИФА и метод ПЦР, совмещение этих методов дает более полную картину происходящего.