ПЦР – лаборатория

Что такое ПЦР-лаборатория?

ПЦР (полимеразная цепная реакция) — основной метод исследования генно-молекулярных лабораторий.

Суть метода состоит в увеличении числа копий участков ДНК вирусов и других возбудителей инфекций, присутствующих в пробах биоматериала. Отсюда понятна высокая чувствительность и специфичность метода. Это причина важности соблюдения требований к чистоте помещений, инструментов и оборудования для ПЦР лабораторий.

 

Любая лаборатория, работающая с методом ПЦР, разделена на зоны:

1.    Зона пробоподготовки. Здесь происходит первичная обработка образцов и выделение исследуемых биополимеров.

2.    Зона приготовления реакционной смеси. Готовится собственно рабочая смесь и производится амплификация.

3.    Зона проведения электрофореза. Анализ продуктов реакции и компьютерная обработка результатов.

Аппаратура для реакций молекулярной биологии высоко специализирована. Оборудование каждой отдельной зоны ПЦР-лаборатории строго регламентируется правилами.

Комплектация зоны пробоподготовки

На этом этапе необходимо защитить образцы от попадания загрязнений и микрофлоры извне. Поэтому все манипуляции проводятся в боксе биологической безопасности II класса. Для подготовки материала понадобятся 3 центрифуги:

·         клиническая;

·         вортекс;

·         микроцентрифуга.

Помимо расходных материалов (пипетки, пробирки, наконечники, емкости с дезрастворами) необходимы твердотельный термостат (25-100°С), вакуумный отсасыватель, холодильник для реагентов.

Комплектация зоны амплификации

В ПЦР не исключено получение ложноположительных и ложноотрицательных результатов. Это возможно при несоблюдении нормативов чистоты воздуха, пробирок и реактивов. Воздух в ПЦР-боксе должен очищаться при помощи бактерицидной лампы, УФ-излучения, ламинарного потока и новых технологий фильтрации

В этой зоне находится термоциклер-амплификатор и детектор флюоресценции. Необходимы холодильники для хранения реагентов и емкости для утилизации.

Комплектация аналитической зоны

Для заключительного этапа и интерпретации результатов понадобится следующее оборудование:

  • камера для электрофореза;
  • трансиллюминатор;
  • видеосистема регистрации результатов;
  • микроволновая печь;
  • колбы, цилиндры, пипетки, наконечники;
  • холодильник;
  • емкости для дезактивации буфера и гелей.

Если лаборатория использует метод ПЦР (real-time PCR), либо ПЦР в модификации Flash, то необходимость в камере для электрофореза отпадает. Если для детекции на последнем этапе используются электрофорез и гибридизационный анализ, то их надо разделить по разным зонам. Пипетки и посуда должны быть строго разграничены.

Главная трудность в работе ПЦР-лабораторий

Это периодическое получение ложных результатов, или контаминация. При несоблюдении требований чистоты и техники безопасности контаминация может стать тотальной.

Чтобы этого избежать, следует разграничить рабочие зоны (включая халаты, посуду и инструменты), организовать автоклавное обеззараживание материала. А также предусмотреть помещения для архива, персонала, хранения инвентаря и реагентов.

 

Оставить заявку на коммерческое предложение: "ПЦР – лаборатория" или Заказать звонок

×