*Цена по запросу.

Пиросеквенирование

Пиросеквенирование – метод, в основе которого лежит синтез дочерней цепи ДНК, комплиментарной матрице, при этом регистрируется присоединение каждого нуклеотида методом хемилюминесценции, и осуществляется отмывка реакционной смеси после каждого шага.

В реакции используются специальные основания с двойными фосфатами – ddNTP. На начальном этапе протекает стандартная ПЦР при участии прямого и обратного праймеров и ДНК-полимеразы, нуклеотид встраивается в цепь, выделяется пирофосфат. При этом матрица ДНК иммобилизована на биотине.

Далее АТФ-сульфурилаза присоединяет пирофосфат к аденозин-5’-фосфосульфату, образуется АТФ, который запускает реакцию окисления люциферина в оксилюциферин, катализируемую люциферазой. Образуется свет в количестве, пропорциональном количеству АТФ. Свет детектируется CCD-камерой и отображается на пирограмме в виде пиков. Высота пиков пропорциональна количеству нуклеотидов, встроившихся в матрицу.

Далее апираза деградирует несвязавшиеся нуклеотиды из реакционной смеси, после этого добавляется новая смесь нуклеотидов.

 

Секвенаторы серии PyroMark – универсальные системы генетического анализа, специально разработанные для детекции точечных мутаций, анализа сайтов метилирования и секвенирования коротких фрагментов ДНК.

Секвенатор PyroMark Q48 Autoprep – усовершенствованная серия приборов, позволяющая проводить пробоподготовку полностью в автоматическом режиме.

 

Преимущества пиросеквенаторов:

  • количественная оценка аллелей, в том числе редко встречаемых;
  • обнаружение неизвестных вариаций нуклеотидных последовательностей;
  • возможность разностороннего исследования образцов при единичном запуске прибора;
  • встроенные контроли исследования, гарантирующие точность и достоверность результатов;
  • быстрое получение точной и однозначной информации о нуклеотидной последовательности;
  • интуитивное программное обеспечение, позволяющее проводить различные исследования с помощью созданных пользователем тестов.

 

 

Наборы реагентов, совместимые с PyroMark Q48:

  • предсказание возраста (метилирование, точность 1.7 лет, маркеры расположены на локусах (ELOVL2 на 6p24.2, C1orf132 на 1q32.2, TRIM59 на 3q25.33, KLF14 на 7q32.3 и FHL2 на 2q12.2), наборы AgePlex Kit, BioVectis, Польша.
  • наборы реагентов для детекции генетических полиморфизмов методом пиросеквенирования с применением системы генетического анализа серии PyroMark «АмплиСенс Пироскрин» (мультифакторные заболевания, онкологические заболевания, фармакогенетика, спортивная генетика).

 

Сравнение платформ

PyroMark Q48 Autoprep

PyroMark Q24 Advanced

PyroMark Q24

PyroMark Q96 ID

Main applications

Анализ SNP, эпигенетика (CpG и CpN), исследование резистентности, идентификация микроорганизмов

Анализ SNP, эпигенетика (CpG и CpN), исследование резистентности, идентификация микроорганизмов

Анализ SNP, исследование резистентности

Анализ SNP, эпигенетика (CpG и CpN), исследование резистентности, идентификация микроорганизмов

Поток (образцов)

1–48

1–24

1–24

1–96

Объём

10 µl

25 µl

25 µl 

40 µl 

ПЦР

5–10 µl (~0.5–3 пмоль)

5–10 µl (~0.5–3 пмоль)

5–10 µl (~0.5–3 пмоль)

20–40 μl (2–4 пмоль)

Длина фрагмента

10–140* п.о. или больше

10–140* п.о. или больше

10–80* п.о.

10–80* п.о.

Подготовка

автоматическая

ручная

ручная

ручная

ПО

PyroMark Q48 Autoprep SW

PyroMark Q24 Advanced SW (firmware 1.5.6903 или выше)

PyroMark Q24 SW 2.0

PyroMark Q96 SW

Функции ПО

SEQ (de novo), CpG/CpN метилирование, SNP, AQ

SEQ (de novo), CpG/CpN метилирование, SNP, AQ

SQA (de novo), CpG метилирование, AQ/SNP

SQA (de novo), CpG метилирование, AQ/SNP

Совместимость реагентов

PyroMark Q48 Advanced, PyroMark Q48 Advanced CpG

PyroMark Q24 Advanced, PyroMark Q24 Advanced CpG

PyroMark Q24 Gold

PyroMark Gold Q96

Чувствительность

2% мут., 98% wt

2% мут., 98% wt

2% мут., 98% wt

2% мут., 98% wt

 

×