При создании лаборатории ПЦР  в клинико-диагностических целях надо руководствоваться нормативно-провавыми актами

  1. СП 1.3.1285-03 "Безопасность работы с микроогранизмами I-II групп патогенности"
  2. СП 1.3.2322-08 "Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенностии и возбудителями паразитарных болезней"
  3. МУ 1.3.2569-09 "Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности"
  4. СП 1.2.036-95 "Порядок учета, хранения, передачи и транспортирования микроогранизмов I-IV групп патогенности".

Лабораторию ПЦР можно организовывать как “с нуля” так и на базе уже действующей лаборатории. Но в любом случае ПЦР-лаборатория должна включать в себя как минимум две рабочие зоны:  1) Зона  выделения ДНК/РНК  2) Зона где происходит непосредственно процесс амплификации и детекция продуктов амплификации.

 

ПОРЯДОК ПРОВЕДЕНИЯ ПЦР

ПЦР-анализ проводят в два этапа в отдельных помещениях (зонах).

Для работы требуются следующие материалы и оборудование:

ЗОНА 1 – для экстракции ДНК из исследуемого материала:

  • ламинарный бокс – опционально (выделение может проводиться на столе)

Ламинарный шкаф, класс II (тип А), вертикальный поток, ширина рабочей поверхности 120 см, БМБ-II-1,2, Ламинарные системы – 339600 руб.

  • твердотельный термостат для пробирок типа «Эппендорф» от 25 до 100°С

Термостат «Драй-блок» типа TDB-120 – 1 шт. – 22360 руб.

  • вакуумный отсасыватель медицинский с колбой-ловушкой для удаления надосадочной жидкости – опционально, в зависимости от используемого типа выделения, можно использовать центрифугу, при этом незначительно увеличится время выделения

«ОМ-1», г. Ульяновск, Россия – 1 шт. – 40678 руб.

  • микроцентрифуга для микропробирок типа «Эппендорф» до 16 тыс об/мин

Центрифуга лабораторная настольная СМ 50 ELMI Ltd. – 1 шт. – 32500 руб.

  • вортекс

Персональный вортекс V-1 plus – 1 шт. – 5200 руб.

  • набор электронных или механических дозаторов переменного объема

Дозатор одноканальный TopPette переменного объема 100-1000 мкл – 1 шт. – 4561 руб.

Дозатор одноканальный TopPette переменного объема 10-1000 мкл – 1 шт. – 4561 руб.

Дозатор одноканальный TopPette переменного объема 0.5-10 мкл – 1 шт. – 4561 руб.

  • одноразовые наконечники для дозаторов переменного объема с аэрозольным барьером до 100 мкл, до 200 мкл и до 1000 мкл

Наконечники универсальные 100-1000 мкл (500 шт./уп.) – 10 уп. – 2499,9 руб.

Наконечники универсальные 5-200 мкл (1000 шт./уп.) – 10 уп. – 2850 руб.

  • одноразовые полипропиленовые завинчивающиеся или плотно закрывающиеся микропробирки на 1,5 мл

Пробирки полипропиленовые, 1.5 мл, типа эппендорф – 1000 шт. – 4200 руб.

  • штативы для микропробирок объемом 1,5 мл

Штатив для пробирок эппендорф 1.5 мл с крышкой (72 пробирки) – 10 шт. – 1086,6 руб.

  • холодильник от 2 до 8 °С с морозильной камерой от минус 24 °С до минус 16 °С.
  • отдельный халат
  • одноразовые перчатки.

ЗОНА 2 – для проведения амплификации ДНК:

  • амплификатор в реальном времени

Амплификатор DW-TL988-II - прибор для проведения ПЦР с возможностью регистрации продуктов реакции в режиме реального времени (4-х канальный: FAM, VIC, ROX, CY5) – 2 250 000 р

или

Амплификатор DW-TL988-II - прибор для проведения ПЦР с возможностью регистрации продуктов реакции в режиме реального времени (2-х канальный: FAM, VIC) – 1 450 735 руб.

(подавляющее большинство тест-систем, производимых в мире – 2-х канальные, редко встречаются тест-системы, содержащие красители для 3-х и более каналов, при этом все они имеют аналоги, предназначенные для работы на 2-х каналах)

  • ПЦР-бокс

ПЦР-бокс БАВ-ПЦР «Ламинар-C» с УФ – 1 шт. – 76800 руб.

  • набор электронных или механических дозаторов переменного объема

Дозатор одноканальный TopPette переменного объема 100-1000 мкл – 1 шт. – 4561 руб.

Дозатор одноканальный TopPette переменного объема 10-1000 мкл – 1 шт. – 4561 руб.

Дозатор одноканальный TopPette переменного объема 0.5-10 мкл – 1 шт. – 4561 руб.

  • одноразовые наконечники для дозаторов переменного объема с аэрозольным барьером до 100 мкл, до 200 мкл и до 1000 мкл

Наконечники универсальные 100-1000 мкл (500 шт./уп.) – 10 уп. – 2499,9 руб.

Наконечники универсальные 5-200 мкл (1000 шт./уп.) – 10 уп. – 2850 руб.

  • штативы для наконечников и микропробирок на 0,5 (0,2) мл
  • холодильник от 2 до 8 °С с морозильной камерой от минус 24 °С до минус 16 °С.
  • отдельный халат
  • одноразовые перчатки

 

Зона I (Зона выделения ДНК/РНК)

Оборудование

Назначение

Ламинарный шкаф, класс II (тип А).jpg

Ламинарный шкаф, класс II (тип А), вертикальный поток, ширина рабочей поверхности 120 см

Защита оператора от патогенных организмов

Центрифуга высокоскоростная для подготовке образцов. Желательно с функцией охлаждения.

Подготовка образцов

Сопутствующее оборудование (вортекс, микроцентрифуга)

Работа с биологическими образцами.

вакуумный отсасыватель.jpeg

вакуумный отсасыватель медицинский с колбой-ловушкой для удаления надосадочной жидкости – опционально, в зависимости от используемого типа выделения, можно использовать центрифугу, при этом незначительно увеличится время выделения

 

Очистка образцов

драй.png

Термостат «Драй-блок»

Поддержание постоянной температуре в пробирке

холодильник.jpg

Холодильник с морозильной камерой

Хранение образцов

 

Зона II (Зона проведения ПЦР)

Оборудование

Назначение

ПЦР-бокс.jpg

ПЦР-бокс

 

Приготовления реакционных смесей для ПЦР и работа с ДНК/РНК пробами

Термоциклер.png

Термоциклер

Проведение полимеразной цепной реакции

Флуориметр.jpg

Флуориметр

Детекция ПЦР. Регистрация флюоресцентного сигнала

вортекс xh-d.jpg

Сопутствующее оборудование (вортекс, микроцентрифуга)

Работа с биологическими образцами.

холодильник.jpg

Холодильник с морозильной камерой

Хранение образцов

 

При планировании ПЦР лаборатории надо учитывать, что все зоны должны быть изолированы и в каждой зоне должна быть отдельная проточно-вытяжная вентиляция.

 

×